美國cellscript試劑盒包括用于體外轉錄的試劑盒以及使用帽類似物或加帽酶的5' RNA加帽的試劑盒。

l mRNA為什么要加帽：

1、防止5'末端被降解。

2、在細胞中，幫助成熟mRNA穿過核膜，進入胞質。

3、增強翻譯。

4、幫助后續(xù)可變剪接的過程。

l 加帽類型：

1、Cap 0型（m7G5ppp5Np）：僅所加的鳥嘌呤核苷酸被甲基化，存在于單細胞。

2、Cap I型（m7G5ppp5NmpNp）：轉錄本第一個核苷酸的2'-O位也被甲基化，普遍存在于所有細胞。

3、Cap II型（m7G5ppp5NmpNmpNp）：轉錄本第一和第二位的2'-O位都甲基化，存在于10％-15％細胞中。

l 體外加帽的必要條件：

1、在基因組全長克隆時，必須在正向引物5'末端添加T7強啟動子序列。

2、以T7啟動子作為體外轉錄啟動子。

3、在正向引物5'末端加一個“蓋帽G"，有利于提高體外轉錄得到的RNA分子的侵染活性。

美國cellscript試劑盒有：

l 美國cellscript試劑盒(C-SCCS1710)特點：

1. ScriptCap™ Cap 1 Capping System提供ScriptCap Capping Enzyme和ScriptCap 2'-O-Methyltransferase（2'氧甲基轉移酶），可在RNA的5'末端產(chǎn)生Cap 0或Cap I帽結構，也可單獨獲得Cap 0或Cap I。

2. 反應后的Cap RNA可直接進行Poly(A)聚合反應，無需再次進行處理，可方便進行后續(xù)的翻譯過程。

3. ScriptCap Cap I Capping System改進了共轉錄加帽方法，使其加帽效率可以接近100%，所有加帽RNA均能夠大量且正確產(chǎn)生，最終可以以合理的成本獲得大量且正確的加帽RNA 。

l 美國cellscript試劑盒(C-SCCS1710)應用：

      該產(chǎn)品多用于用于動物體外RNA轉錄合成過程，以進行5'末端的Cap 0或Cap 1結構的產(chǎn)生，提高體外RNA的穩(wěn)定性和翻譯效率。